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簡要描述：P2RY12（也稱為 P2Y12）是一種腺苷 5'-二磷酸 (ADP) 受體，也是嘌呤能 G 蛋白偶聯(lián)受體 P2Y 家族的成員。它在外周組織的血小板中表達，也在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)小膠質細胞（Homeostatic Microglia)中特異性表達。由于P2RY12幾乎不在巨噬細胞中表達，所以它是用于區(qū)分存在腦血管周圍的巨噬細胞和小膠質細胞的有效標志物1）。
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技術文章
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|
抗P2RY12，豚鼠
Anti P2RY12, Guinea Pig
P2RY12（也稱為 P2Y12）是一種腺苷 5'-二磷酸 (ADP) 受體，也是嘌呤能 G 蛋白偶聯(lián)受體 P2Y 家族的成員。它在外周組織的血小板中表達，也在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)小膠質細胞（Homeostatic Microglia)中特異性表達。由于P2RY12幾乎不在巨噬細胞中表達，所以它是用于區(qū)分存在腦血管周圍的巨噬細胞和小膠質細胞的有效標志物1）。此外，ADP可用作細胞損傷的信號，小膠質細胞中的P2RY12被認為在接收神經(jīng)細胞損傷方面發(fā)揮作用。
本產(chǎn)品為豚鼠來源多克隆抗體，可用于免疫組織染色的多重染色。
外觀：液體
濃度：蛋白濃度 0.45～0.65 mg/mL
◆抗體信息
抗體種類 | 多克隆抗體 |
抗原 | P2RY12的合成肽 (C端同源序列) |
免疫動物 | 豚鼠 |
組成 | PBS、0.05% die氮化鈉 |
標記 | 未標記 |
交叉性 | 小鼠※ |
應用 | 免疫組織染色（冰凍切片） 1︰500-2,000 |
※ 大鼠的染色實例請查看下方“數(shù)據(jù)"部分。
◆Protocol（示例）
1. 灌注固定：使用檸檬酸鈉/PBS灌注除血后，4% PFA灌注
2. 后固定： 4% PFA (～24 h)
3. 蔗糖替換：30%蔗糖/PBS（4℃，過夜~約2天）
4. 制備冰凍切片：去除蔗糖后，制備冰凍包埋塊，并用低溫恒溫器制備30 μm厚的切片
5. 封閉：5% 正常山羊血清，0.3% Triton X-100/PBS（4℃，過夜）
6. 一抗：抗 P2RY12，豚鼠（1︰1,000），1% 正常山羊血清，0.3% TritonX-100/PBS（4℃，過夜~2 天）
7. 清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)
8. 二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) (1:500) （產(chǎn)品編號： 568-77901), 1% 正常山羊血清，
0.3% TritonX-100/PBS (室溫，2 h)
9. 清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)
10. 封裝：封片劑封裝，4℃下避光存儲
◆數(shù)據(jù)
性能數(shù)據(jù)
▼ 與抗Iba1抗體比較
使用抗P2RY12抗體和抗Iba1抗體對小鼠大腦（冰凍切片）進行免疫組織染色。
| <數(shù)據(jù)提供> 京都工藝纖維大學 應用生物學系 宮田老師 |
■ 使用抗體
P2RY12
一抗：抗 P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（產(chǎn)品編號：568-77901）
Iba1
一抗：抗iba1，兔源（免疫細胞化學用）（產(chǎn)品編號：019-19741）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號：566-80511)
【結果】
已確認P2RY12信號和Iba1信號的共定位。
▼ 鑒別小膠質細胞和巨噬細胞
使用抗P2RY12抗體（小膠質細胞標志物）、抗 Iba1抗體（小膠質細胞/巨噬細胞標志物）和抗層粘連蛋白抗體（腦血管基底膜標志物）對小鼠大腦皮層和延髓末端的冰凍切片進行三重染色，確認細胞定位。
| <數(shù)據(jù)提供> 京都工藝纖維大學 應用生物學系 宮田老師 |
■ 使用抗體
P2RY12
一抗：抗P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)產(chǎn)品編號：568-77901）
Iba1
一抗：抗iba1，兔源（免疫細胞化學用）（產(chǎn)品編號：019-19741）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號：566-80511)
層粘連蛋白
一抗：抗層粘連蛋白抗體（大鼠，宮田老師實驗室制備）1︰200
二抗： DyLight™ 405 結合AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG (H+L)（生產(chǎn)商編碼：112-475-003）
【結果】
Iba1陽性細胞中，腦實質內的細胞呈P2RY12陽性，可能是小膠質細胞（三角箭頭）。 而Iba1陽性/P2RY12陰性的細胞存在于腦血管基底膜周圍，這些細胞可能是巨噬細胞（箭頭）。
▼ 與抗Iba1抗體和抗TMEM119抗體比較
使用抗P2RY12抗體、抗Iba1抗體和抗TMEM119抗體對小鼠大腦和脊髓（冰凍切片）進行免疫組織染色。
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■ 使用抗體
P2RY12
一抗：抗P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 647 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（產(chǎn)品編號：566-78421）
Iba1
一抗：抗iba1，山羊源（產(chǎn)品編號：011-27991）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (產(chǎn)品編號：561-78351)
TMEM119
一抗：其他公司 抗TMEM119抗體 (兔源) 1︰100
二抗：Alexa Fluor® 594-AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號： 561-78471)
【結果】
與抗TMEM119抗體相比，使用FUJIFILM Wako的抗P2RY12抗體染色能更清晰地檢測細微的突起結構。
▼與其他公司產(chǎn)品比較
使用本產(chǎn)品和其他公司的抗P2RY12抗體對小鼠大腦和脊髓（冰凍切片）進行免疫組織染色。
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■ 使用抗體
本產(chǎn)品
一抗：抗 P2RY12，豚鼠（產(chǎn)品編號：011-28873，本產(chǎn)品）1︰1,000（抗體濃度：0.5 μg/mL）
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（產(chǎn)品編號：562-78401）
其他公司產(chǎn)品
一抗：其他公司 抗P2RY12（兔源）1︰200（抗體濃度：0.5 μg/mL）
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (產(chǎn)品編號：567-78451)
【結果】
傳統(tǒng)產(chǎn)品中可觀察到神經(jīng)細胞的非特異性信號（三角箭頭），而本產(chǎn)品中幾乎檢測不到非特異性信號。
◆應用數(shù)據(jù)
▼ 免疫組織染色
小鼠
| 物種：小鼠（C57BL/6J） 部位：海馬體（CA2） 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰200 備注：藍色為DAPI <數(shù)據(jù)提供> F大學I老師 |
| 物種：小鼠 部位：前額皮質 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰900 備注：藍色為DAPI <數(shù)據(jù)提供> 東北大學 精神神經(jīng)學領域 俞老師 |
| 物種：小鼠 部位：大腦皮層 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰10,000 備注：藍色為DAPI <數(shù)據(jù)提供> 九州大學 大學院醫(yī)學研究院 神經(jīng)解剖學領域 山田老師 |
| 物種：小鼠 部位：海馬體 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰500 <數(shù)據(jù)提供> 御茶水女子大學人類生命科學研究所 橋本老師 |
| 物種：小鼠 部位：海馬體 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰1,000 備注：活化處理 （檸檬酸鈉緩沖液） <數(shù)據(jù)提供> 御茶水女子大學人類生命科學研究所 橋本老師 |
 | 物種：小鼠 部位：正中隆起 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰1,000 <數(shù)據(jù)提供> 旭川醫(yī)科大學 解剖學講座 機能形態(tài)學領域 古部老師 |  | 物種：小鼠 部位：脊髓 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰2,000 <數(shù)據(jù)提供> 九州大學 大學院藥學研究院 藥理學領域 津田老師 河野老師 |
| 物種：小鼠 部位：視網(wǎng)膜 樣品：石蠟切片（FFPE） 稀釋倍率：1︰400 備注：活化處理（TE 緩沖液，pH 9.0， 高壓鍋加壓 3 min） <數(shù)據(jù)提供> 川崎醫(yī)科大學病態(tài)代謝學教室 石塚老師 |
大鼠
三角箭頭部分推測為血管周圍的巨噬細胞。 | 物種：大鼠 部位：大腦皮層 樣品：冰凍切片 稀釋倍率：1︰500 備注：活化處理（pH6.0 醋酸緩沖液， 75℃，20 min），藍色為DAPI <數(shù)據(jù)提供> 京都府立醫(yī)科大學 生體構造科學部門 小泉老師 |
以上實驗數(shù)據(jù)由研究人員友情提供，無法保證實驗結果。關于以上數(shù)據(jù)的相關問題我們也無法回答，敬請諒解。
◆用戶反饋
以下是研究人員提供的評估問卷結果。
評價（原文翻譯）
以下為所有同意公開評論的研究人員名單。
綜合評價 | 所屬單位 | 姓名 | 評價 |
滿意 | 旭川醫(yī)科大學 解剖學講座 機能形態(tài) 學領域 | 古部瑛莉子老師 | 小膠質細胞的細小突起也能很好地染色，非常好。而且還能染色細胞體。 |
滿意 | 川崎醫(yī)科大學 | 石塚佑太老師 | 小鼠視網(wǎng)膜石蠟包埋切片用抗 Iba1 抗體（WAKO #019-19741 兔源抗 體）共染，兩者均觀察到小膠質細胞特異性染色。 |
滿意 | 九州大學 神經(jīng)解剖學領域 | 山田純老師 | 滴度很高，可確認與Iba1和TMEM共存。 |
滿意 | 京都府立醫(yī)科大學 | 小泉崇老師 | 使用樣品是大鼠大腦。 |
滿意 | F大學 | I老師 | 印象中可特異性染色。 |
滿意 | O大學 | H老師 | 可用于大腦切片的免疫染色。特異性非常高，使用常規(guī)的染色protocol也 能獲得漂亮的染色圖像。過去使用的P2RY12 抗體都是rabbit host或goat host，雖然rabbit host的特異性很高，但難以與其他抗體結合進行多重染 色，而goat host的有特異性，但其著色和熒光很弱，難以拍攝顯微照片， 希望其他host中有更好的P2RY12抗體。 本次使用的guinea pig host是非常易于使用的產(chǎn)品，不僅可與其他抗體結 合進行多重染色，而且特異性高，可產(chǎn)生清晰的顯色和熒光。 |
比較滿意 | 九州大學 藥理學領域 | 河野敬太 老師 | 可用于組織染色，但染色性能略遜于之前使用過的其他公司的產(chǎn)品（高濃 度顯示非特異性）。 |
稍微不滿意 | 東京大學大學院 機能病態(tài)學教室 | 高島翔 老師 | 在阿爾茨海默病小鼠模型的冰凍大腦切片上使用了間接熒光抗體法，但未 獲得與 IBA1 抗體染色圖像一致的染色結果。 |
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| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 015-28871 | Anti P2RY12, Guinea Pig 抗 P2RY12抗體，豚鼠 | 10 μL | 免疫化學用 | |
| 011-28873 | Anti P2RY12, Guinea Pig 抗 P2RY12抗體，豚鼠 | 100 μL | 免疫化學用 |
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