T淋巴細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

T淋巴細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

iMediam for T

iMediam for T是人T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)用的無血清培養(yǎng)基。通過抗CD3抗體/IL-2激活，與單獨(dú)使用抗CD3抗體相比，本產(chǎn)品可以更有效地增殖T細(xì)胞。

◆特點(diǎn)

●　可無血清培養(yǎng)T細(xì)胞

●　Xeno-free（Chemically-defined medium）

●　已向日本厚生勞動(dòng)省申請(qǐng)材料合格認(rèn)證：再生醫(yī)療等制品材料適格性確認(rèn)書

●　適   用：T淋巴細(xì)胞

●　保存條件：冷藏、避光場(chǎng)所（2-10°C）

●　無菌測(cè)試：內(nèi)毒素（顯色法）、支原體（培養(yǎng)法）、真菌/細(xì)菌（瓊脂平板表面涂抹法）

◆應(yīng)用實(shí)例

含血清培養(yǎng)基與iMediam for T的性能比較（培養(yǎng)14天）

在知情同意的情況下，從9名健康人的血液中分離外周血單核細(xì)胞（PMBC），然后使用含血清的培養(yǎng)基和iMediam for T無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)進(jìn)行比較。在OKT3抗體固相化的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)5天，然后轉(zhuǎn)移到透氣性培養(yǎng)袋中培養(yǎng)，共計(jì)培養(yǎng)14天。最終培養(yǎng)基量為2000 mL。

■ 操作方案

容器： OKT3抗體固相化培養(yǎng)瓶225

細(xì)胞：健康個(gè)體PMBC 2×10⁷ cells/培養(yǎng)瓶

（50 mL IL-2：700 U/mL）

↓

Day 5

細(xì)胞轉(zhuǎn)移到透氣性培養(yǎng)袋中  共計(jì)1000 mL

↓

Day 8

透氣性細(xì)胞培養(yǎng)袋加液  共計(jì)2000 mL

↓

Day 14

檢測(cè)細(xì)胞數(shù) 分析表面抗原

◆表面抗原分析

在知情同意的情況下，將 3名健康個(gè)體PMBC在iMediam for T無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天后，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞指標(biāo)的CD3陽性細(xì)胞的比例。3份樣品中CD3的比例都在98%以上，由此可見，T淋巴細(xì)胞是選擇性增殖的。

◆電子顯微鏡/吉姆薩染色

◆規(guī)格

應(yīng)用：人T淋巴細(xì)胞  

保存條件：冷藏、避光（2-10°C）

無菌檢測(cè)： ?內(nèi)毒素：顯色法 ?支原體：培養(yǎng)法 ?真菌、細(xì)菌：瓊脂平板表面涂片法

操作步驟：

? 準(zhǔn)備OKT3抗體固相化燒瓶225。使用PBS稀釋OKT3抗體至5-10 μg/mL，涂抹于培養(yǎng)瓶底部（使用225 cm² 培養(yǎng)瓶時(shí)濃度為10 μg/mL）。

? 將3-5×10⁷ 個(gè)PBMC懸浮于30-50 mL的iMediam for T中。

? 根據(jù)細(xì)胞增殖狀態(tài)適量添加iMediam for T。

? 培養(yǎng)5-7日后，將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到透氣性細(xì)胞培養(yǎng)袋中，添加適量iMediam for T，再培養(yǎng)2-3周。根據(jù)培養(yǎng)狀況適當(dāng)增加培養(yǎng)袋數(shù)量。

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