EFLUXX-ID®多藥耐藥性檢測試劑盒

EFLUXX-ID^® multidrug resistance assay kit

多藥耐藥性檢測試劑盒——監測三種ABC轉運蛋白

簡單免洗檢測，可同時監測3種耐藥性相關的ABC轉運蛋白

耐藥性是一種因ATP結合盒式（ATP Binding Cassette，ABC）膜轉運蛋白家族上調介導所產生的現象。

ABC轉運蛋白的過度表達了加速有毒物質從細胞中的去除，例如hualiao劑從腫瘤細胞中排出，或抗生素從耐藥菌株中排出。

Enzo的EFLUXX-ID^® 多藥耐藥性檢測試劑盒可實現同時對三種臨床相關的 ABC 轉運蛋白的功能檢測：包括MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2 和 BCRP。

◆特點

●　簡單免洗的操作步驟，結果可在1小時內獲得

●　可檢測與3種ABC轉運蛋白（MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP）活性相關的耐藥性

●　通過單一專用染料可定量檢測活細胞中的多藥耐藥性（MDR）活性，并以MDR 活性因子（MAF）表征

●　試劑盒內含有三種已知的MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP蛋白特異性抑制劑

●　可檢測Calcein AM染料無法檢測的BCRP蛋白活性

●　有綠色、金色兩種熒光染料可供選擇

●　兩種染料均可與表達GFP的細胞系或其他CELLESTIAL^® 染料同時使用

◆作用機制

 EFLUXX-ID^®使用了一種疏水性非熒光化合物，這種化合物容易穿透細胞膜，經細胞內酯酶水解成親水性熒光染料。除非EFLUXX-ID^® 染料被泵出至細胞外，否則酯酶裂解的染料會一直存在于細胞內。因此，表現出耐藥性的細胞將染料主動運輸泵出胞外，會出現熒光減弱的現象。EFLUXX-ID^® 檢測是目前少有可同時監測三種主要的ABC轉運蛋白并能夠分析單泵活性的試劑盒。

表1：EFLUXX-ID^® 多藥耐藥性染料與其他熒光染料的兼容性

圖1：對三種主要ABC轉運蛋白的活性進行檢測。使用EFLUXX -ID Green（上）、Gold（中）或Calcein AM（下）染料，通過流式細胞術評估CHO K1細胞中ABC轉運蛋白的活性。與未處理的細胞相比，用ABC轉運蛋白特異性抑制劑（圖中陰影部分）處理可誘導染料保留在細胞內（圖中實線部分）。平均熒光強度（MFI）的差異表明了對應蛋白的活性，在圖中通過多藥耐藥性活性因子值（MAF）進行表征。更高的MAF值表明EFLUXX-ID染料對抑制劑有著良好的特異性。而Calcein AM染料的低MAF值表明其（常用的MDR檢測探針）無法檢測BCRP活性。

圖2：使用EFLUXX-ID^® Green和EFLUXX-ID^® Gold染料在CHO K1細胞中評估已知抑制劑對ABC轉運蛋白活性的結果分析。將細胞與試劑盒中含有的MDR普通抑制劑（左一）、轉運蛋白特異性抑制劑在37°C下孵育5 min。隨后在37°C下用指定的染料染色細胞30 min，并立即利用流式細胞術進行分析。所用抑制劑：5 µM環胞霉素 A（MDR普通抑制劑）、20 µM維拉帕米（P-gp特異性抑制劑）、0.05 mM MK-571（MRP特異性抑制劑）、0.05 mM新生霉素（BCRP特異性抑制劑）。

圖3：EFLUXX-ID^® Green 490/514 nm ex/em和Gold 530/570 nm ex/em 試劑的光譜特性可與其他常見的熒光染料進行多重檢測。

◆產品詳情